2019年3月1日，美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)在官網(wǎng)發(fā)布血管緊張素II受體阻滯劑（ARBs）藥物氯沙坦的自愿召回公告，涉及到印度Hetero Labs Ltd.生產(chǎn)的87批氯沙坦鉀片，而導(dǎo)致該召回的主要原因是發(fā)現(xiàn)其中含有N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）雜質(zhì)。由于NMBA是已知?jiǎng)游锖蜐撛谌祟?lèi)的致癌化學(xué)物質(zhì)，是繼N?亞硝基二甲胺（NDMA）和N?亞硝基二乙胺（NDEA）之后上市ARBs藥物中檢測(cè)到的第三種亞硝胺類(lèi)遺傳毒性雜質(zhì)。此后，F(xiàn)DA相繼公布了Teva Pharmaceuticals和Vivimed Life Sciences Pvt Ltd等制藥公司自愿召回涉及氯沙坦鉀的63批藥品，其原因?yàn)闄z出含有NMBA。同時(shí)，加拿大衛(wèi)生部（HC）及英國(guó)衛(wèi)生部（DHSC）也在官網(wǎng)上發(fā)布了氯沙坦類(lèi)藥物的召回公告。直至2019年6月12日，Teva Pharmaceuticals仍在擴(kuò)大自愿召回7批檢出NMBA氯沙坦鉀片，可見(jiàn)藥物中的遺傳毒性雜質(zhì)仍受到公眾及藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)的高度關(guān)注。
在FDA已公布的ARBs藥物亞硝胺雜質(zhì)限度表中，NMBA的日允許攝入量最大值為0.96ppm。 FDA評(píng)估了暴露于9.82ppm水平NMBA相比于終生暴露于0.96ppm NMBA的服藥水平，表明6個(gè)月的暴露量不會(huì)存在患癌風(fēng)險(xiǎn)。
N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）
N-Nitroso-N-methyl-4-aminobutyricacid(NMBA)
CAS. 61445-55-4
因此，為了確?；颊咴诰彌_期可獲得氯沙坦類(lèi)藥物，F(xiàn)DA不反對(duì)含NMBA低于9.82ppm的氯沙坦保持銷(xiāo)售。該過(guò)渡緩沖期FDA設(shè)為6個(gè)月，直至生產(chǎn)企業(yè)提供亞硝胺雜質(zhì)符合要求的氯沙坦藥物來(lái)填補(bǔ)市場(chǎng)。
目前，關(guān)于氯沙坦鉀中NMBA的檢測(cè)方法尚未見(jiàn)公開(kāi)報(bào)道，為及時(shí)應(yīng)對(duì)市場(chǎng)檢測(cè)需求，島津中國(guó)率先推出了基于LC-MS/MS技術(shù)的檢測(cè)方法，該方法操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，適用性強(qiáng)，可有效用于氯沙坦鉀中NMBA的分析檢測(cè)。
1.1 儀器：?LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用儀，含有：LC-30AD×2輸液泵，DGU-20A5R在線脫氣機(jī)，SIL-30AC自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-30A柱溫箱，CBM-20A系統(tǒng)控制器，LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜儀，LabSolutions（Version 5.82 SP1）色譜工作站。
1.2 分析條件：
液相色譜條件
| 色 譜 柱 | ：Shim-pack XR-ODS II 2.0 mm I.D.× 100 mm L., 2.2 μm |
| 流 動(dòng) 相 | ：A相-0.1%甲酸水溶液；B相-甲醇 |
| 流 速 | ：0.3 mL/min | 柱溫 | ：40℃ |
| 進(jìn)樣體積 | ：2 μL | 洗脫方式 | ：梯度洗脫 |
?
質(zhì)譜條件
| 離子化模式 | ：ESI，正離子檢測(cè) | 碰撞氣 | ：氬氣 270 kPa |
| 霧化氣流速 | ：3.0 L/min | 加熱模塊溫度 | ：400℃ |
| 加熱氣流速 | ：10.0 L/min | 干燥氣流速 | ：10.0 L/min |
| 接口溫度 | ：300℃ | 掃描模式 | ：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM) |
| DL溫度 | ：250℃ | MRM參數(shù) | ：見(jiàn)下表 |
?
1.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液：取NMBA標(biāo)準(zhǔn)貯備液，以純甲醇逐級(jí)稀釋為0.5、1、2、5、10、20、50、100 ng/mL的八個(gè)不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
1.4 樣品溶液：取氯沙坦鉀三批原料藥（符合EP9.0）0.1 g于10 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲1 min至全部溶解，放冷至室溫，用甲醇定容待測(cè)。
2.1標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖
圖1. NMBA標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（100 ng/mL）
（黑色-總離子流；粉色-MRM147.15/117.10；藍(lán)色-MRM147.15/87.10；棕色-MRM147.15/44.10）
2.2 線性關(guān)系及檢出定量限
圖2. NMBA標(biāo)準(zhǔn)曲線
檢出限（LOD）0.5 ng/mL(MRM147.15/117.10)，定量限（LOQ）1.0 ng/mL (MRM147.15/117.10)
2.3 精密度實(shí)驗(yàn)：10 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液為樣本連續(xù)進(jìn)樣，日內(nèi)及日間保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于0.1%，峰面積低于1.10%。
2.4 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)
取0.1 g氯沙坦鉀樣品于10 mL容量瓶中，加入NMBA標(biāo)準(zhǔn)品溶液(相當(dāng)于50、100、200 ng NMBA標(biāo)準(zhǔn)品)，按照1.4中的方法進(jìn)行處理，上機(jī)分析。加標(biāo)的氯沙坦鉀溶液色譜圖（以200 ng加標(biāo)量為例）見(jiàn)圖3。三個(gè)平行樣品的低中高平均回收率分別為98.04%，94.40%，95.61%。
圖3 NMBA加標(biāo)量為200 ng時(shí)氯沙坦鉀溶液色譜圖
2.5 檢測(cè)結(jié)果：三批樣品中NMBA均低于最小檢出限（LOD）。
本工作建立了使用LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定氯沙坦鉀原料藥中N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）雜質(zhì)的方法，在0.5~100 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，檢出限和定量限分別為0.5 ng/mL和1.0 ng/mL。使用此方法對(duì)三批次氯沙坦鉀原料藥進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果為NMBA未檢出。本方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、準(zhǔn)確，可有效用于氯沙坦鉀原料藥中NMBA的分析檢測(cè)。